Оценка специфического противоопухолевого иммунитета.

Оценка специфического противоопухолевого иммунитета.

Современные методы определения опухолеспецифических Т-клеток заслуживают особого внимания. Непрямые методы их обнаружения можно определить как методы, требующие манипуляций in vitro для функциональной оценки Т-клеток, к этим методам относят анализ методом лимитирующих разведений, ELISPOT и внутриклеточное окрашивание на цитокины. В основном, эти методы приводят к занижению числа специфических Т-клеток — либо из-за того, что требуют пролиферации клеток в культуре in vitro, либо из-за того, что они не позволяют оценить функциональную гетерогенность клеток. С другой стороны, доступные в настоящее время прямые методы обнаружения антигенспецифических Т-лимфоцитов, которые могут применяться без использования культур клеток in vitro, имеют крайне ограниченное применение.

Такие методы основаны на определении генетически модифицированных трансгенных Т-клеток, которые могут быть использованы только в системах адаптивного переноса реципиентам, или на использовании тетрамерных комплексов молекул МНС с пептидами для подсчета Т-клеток со специфическими рецепторами. Последний метод получил наиболее широкое распространение. Его принцип основан на том, что Т-клеточные рецепторы специфически взаимодействуют с индивидуальными комплексами молекул МНС с пептидами.

Аффинность взаимодействия Т-клеточного рецептора с таким комплексом обычно очень низка — она на несколько порядков ниже аффинности взаимодействия моноклональных антител с антигеном, что не позволяет обнаружить антигенспецифические Т-клетки. Однако аффинность этого взаимодействия можно существенно повысить, если связать несколько молекул МНС в один стрептавидин-биотиновый комплекс.

Аффинность взаимодействия такого комплекса с рецепторами Т-клеток становится сопоставимой с аффинностью антител, и после нанесения флуоресцентной метки такие комплексы становится возможным использовать для анализа антигенспепифических популяций Т-клеток методом проточной цитофлуориметрии; возможно совмещение этого метода с внутриклеточным окрашиванием. Существенным ограничением использования рассматриваемого метода является возможность тестирования ответов лишь на отдельные комплексы молекул HLA с пептидами.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *